●如果色譜柱在使用過程中發(fā)現(xiàn)每個峰的峰形都出現(xiàn)問題，先考察是否有連接問題。管線可能太長或太短，這種情況可能導(dǎo)致滲漏或峰分叉/拖尾。如果管線太長，密封圈位置不當(dāng)，將發(fā)生滲漏。如果管線推出的距離不夠，將會產(chǎn)生一段死空間，形成混合腔，導(dǎo)致柱外體積，使峰形變壞。

●如果在樣品分析時發(fā)現(xiàn)每個色譜峰都有雙峰出現(xiàn)，尤其在采用單一純物質(zhì)時，所有的接頭都是正常連接，則可以確定是色譜柱出現(xiàn)問題了，一般是柱頭受損或者柱頭固定相污染引起的。

●如果樣品基質(zhì)比較臟，使用一段時間之后，發(fā)現(xiàn)的峰分叉或拖尾等問題，很有可能是保護(hù)柱失效造成的。一般粗略判斷標(biāo)準(zhǔn)，塔板數(shù)、壓力或分離度的改變超過10%，就需要更換保護(hù)柱了。保護(hù)柱是消耗品，建議直接更換，不需要再生。 

●當(dāng)用溶劑極性強(qiáng)度大的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體系中以水為主時，如果樣品進(jìn)樣量大，如定量管為20μL，此時單一的純物質(zhì)會出現(xiàn)雙峰，第二峰比di一峰小（每次都不太一樣），且拖尾，保留時間會提前（相對進(jìn)樣量少而言），將進(jìn)樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎！＿@是樣品的溶劑與流動相極性相差太大，而流動相來不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的溶劑效應(yīng)問題，該情況的異常建議用流動相作為稀釋劑或減少進(jìn)樣量以消除溶劑效應(yīng)。

●目前HPLC分析多為反相色譜，流動相多為甲醇、乙腈、水，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解，更佳的溶解方法是用流動相溶解。在實際分析中，有時候為了樣品的溶解性或穩(wěn)定性加入了一點的緩沖液，緩沖液的酸堿性可能會導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)化，從而產(chǎn)生雙峰現(xiàn)象。此時需要更換緩沖液，調(diào)整溶劑pH值，或者用流動相配置樣品。

●有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，而這種互變異構(gòu)體無法分開，而是以一個動態(tài)平衡存在。在色譜分析時，在一個特定的條件下（如pH值、流動相極性、溫度等），一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰，雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其pH，雙峰現(xiàn)象將消失。

●體系pH值對色譜雙峰的影響出現(xiàn)在各個環(huán)節(jié)上（前面已經(jīng)提到），尤其在緩沖液流動相平衡過程中其影響更為明顯。當(dāng)連續(xù)進(jìn)樣時，受pH的連續(xù)變化影響會經(jīng)常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時，流動相的pH盡量遠(yuǎn)離被分析物的等電點，否則也容易引起雙峰的產(chǎn)生。在用離子對試劑分析時，選擇不好條件也會容易引起雙峰的產(chǎn)生。