維生素B12，又稱鈷胺素，是人體必須的維生素之一，但人體對(duì)其需求量相對(duì)較少，每天僅需3μg即可滿足，維生素B12是唯一的一種需要腸道分泌物幫助才能被吸收的維生素，可以參與制造骨髓紅細(xì)胞，防止惡行貧血，防止大腦神經(jīng)受到破壞。但過多量的維生素B12可能導(dǎo)致神經(jīng)損害、加重白血病或者引起過敏性疾病等問題。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的維生素B12含量在嬰幼兒配方食品中為8.0μg/kg：兒童用乳粉為10~30μg/kg：孕產(chǎn)婦用乳粉為10~66μg/kg。

為保障廣大群眾食品安全，月旭科技更新推出Welchrom^? 維生素B12親和柱，廣泛地應(yīng)用于飲料、牛奶和奶粉，飲料等樣品的提取，對(duì)提高食品的質(zhì)量和安全性起到十分重要的作用。完全符合GB 5009.285-2022食品中維生素B12的測(cè)定等國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)。

原理

Welchrom^? 維生素B12免疫親和柱測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，維生素B12單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的維生素B12經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過維生素B12免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，維生素B12與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫維生素B12，然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。

凈化步驟

01

取10g試樣于50mL離心管中，加入30mL乙酸鈉緩沖液，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至4.0，加入0.2g胃蛋白酶、0.05g淀粉酶和２mL氰化鉀溶液，充分混合。將樣品溶液放入水浴恒溫振蕩器，在37℃，振蕩酶解30min。

02

酶解后轉(zhuǎn)入100℃水浴中，保持30min，取出冷卻至室溫。將樣品溶液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。

03

移取上述溶液40mL至50mL離心管中，在10000r/min下離心10min，取上清液用玻璃纖維濾紙過濾后備用。

04

將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器。

05

將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S的流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體。

06

以10.0mL的PBS溶液和去離子水依次淋洗柱子1次，流速約為1-2滴/S，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體。

07

準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。

色譜柱：月旭UItimate^? XB-C18（4.6×150mm，3μm）。

流動(dòng)相：

柱溫：40℃；

紫外檢測(cè)器：361nm；

流速：0.8mL/min；

進(jìn)樣量：100μL。

流動(dòng)相配置

A（0.04%三氟乙酸）：移取200μL三氟乙酸，加入500mL水，混勻。

B（乙腈）：色譜級(jí)乙腈，抽濾。

譜圖

產(chǎn)品信息