2023-05-22
Hello小伙伴們大家好,液相色譜是我們常用的大型分析儀器之一,原理及操作我們自然是非常的熟悉了,但每次提到液相色譜故障排查的時候有些小伙伴就會頭疼了,那種肉眼可見的堵和漏是比較容易解決的,難的是那種不重現(xiàn)沒有規(guī)律的問題。今天小編就給大家揭秘液相與光化學(xué)衍生器聯(lián)用的故障排查實(shí)例一則,思路和邏輯很重要,記得做筆記奧。
卷宗案情陳述
事情是這樣的,客戶做黃曲霉毒素檢測,購買了WelView光化學(xué)衍生器后,客戶反饋系統(tǒng)壓力高,超壓停機(jī),另外黃曲霉毒素G1和G2分離度也達(dá)不到藥典要求,也就是R<1.5。客戶申請了其它品牌液相的工程師,解決了所用液相堵塞問題,但是超壓問題依然存在,于是又申請我們的售后小哥哥上門排查光化學(xué)衍生器。
月旭售后黃探長奔赴案發(fā)現(xiàn)場
由于客戶陳述過使用其它品牌ODS-2色譜柱分離度達(dá)不到藥典要求,我們的黃探長申請了月旭新色譜柱,并攜帶標(biāo)準(zhǔn)品奔赴客戶現(xiàn)場了。
黃探長明察秋毫排查故障原因
接下來我們先分析下客戶存在的問題:
1、LC-20AT+FLD液相系統(tǒng)搭配光化學(xué)衍生后超壓報警停機(jī),由于客戶自動進(jìn)樣器能承受的最大壓力是20Mpa,超過設(shè)定值系統(tǒng)會自動停止工作。
2、色譜柱分離效果不佳,達(dá)不到藥典要求,分離度不佳跟色譜柱有直接關(guān)系,換柱子是最直接快速高效的方法。
實(shí)驗(yàn)條件:
流動相
MeOH:ACN:H2O=40:18:42。
檢測器FLD
激發(fā)波長365nm,發(fā)射波長450nm。
黃探長到現(xiàn)場后首先要排查原因,具體步驟如下:
1、觀察光化學(xué)衍生器開機(jī)正常,結(jié)合之前客戶的色譜圖,判斷衍生效果良好。
2、排查系統(tǒng)壓力高原因,我們售后小哥更換上月旭ODS-3新的活化好的色譜柱后,比較前后壓力,排查是否是舊柱子的原因。壓力依然高,并非柱子堵塞。
3、拆掉柱子系統(tǒng)背壓0.9Mpa,無堵塞現(xiàn)象,排除液相系統(tǒng)堵塞原因。
4、通過上述三步排查后,猜測可能是系統(tǒng)未平衡好,于是再次平衡1h,系統(tǒng)壓力17Mpa,依然較高,無法串聯(lián)光化學(xué)衍生器使用。
5、于是黃探長考慮溫度對柱壓的影響,將柱溫箱溫度設(shè)置為40℃,平衡好后壓力降至12-13Mpa,串聯(lián)好光化學(xué)衍生器。
6、待系統(tǒng)穩(wěn)定后,進(jìn)樣25μL混標(biāo),出峰正常。
7、鑒于之前客戶使用其他品牌ODS-2色譜柱分離度達(dá)不到藥典要求,黃探長分別使用ODS-3及XB-C18兩種不同的色譜柱供測試。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計表
案情回顧總結(jié)
黃探長的工作圓滿完成,我們回顧一下整個案子的過程便于總結(jié)經(jīng)驗(yàn)。在以后的工作中遇到問題,可以獨(dú)立判斷原因。
接下來我們來了解下液相系統(tǒng)壓力的影響因素。
案情拓展:液相系統(tǒng)壓力影響因素
影響系統(tǒng)壓力的因素主要有流動相的溶劑組成、溫度及流速這三方面。
1、流動相的粘度是產(chǎn)生反壓的主要原因,下圖為有機(jī)溶劑-水的粘度隨組成與壓力的關(guān)系圖:
由上圖可以看到,乙腈-水比例為(20:80)、甲醇-水比例為(40:60至50:50)時,系統(tǒng)的壓力最大。因此,在做實(shí)驗(yàn)時應(yīng)盡量避開這個比例范圍。另外,異丙醇粘度大,一般不作流動相使用。
2、流速對反壓的影響是線性關(guān)系,流速增加,反壓亦增大。
3、溫度對反壓的影響是反比關(guān)系,溫度升高,反壓降低,對某些流動相的影響更大一些。
4、液相色譜儀各模塊之間的連接管路也會產(chǎn)生壓力,系統(tǒng)壓力與管路的長度成正比,與管路直徑的四次方成反比(1/4D)。上述考慮的是柱外因素對系統(tǒng)壓力的影響,色譜柱對系統(tǒng)壓力的影響也很大,反壓與色譜柱長度成正比,與填料顆粒度的平方成反比(2.5μm填料比3.5μm填料反壓高)。
常見壓力變化及原因:
造成壓力高問題的主要原因:
1)溫度太低;
2)流速太高;
3)流動相粘度大;
4)管路堵塞;
5)儀器或色譜柱堵塞;
6)壓力傳感器問題。
產(chǎn)生壓力低情況的可能原因:
1)系統(tǒng)內(nèi)有滲漏處;
2)單向閥堵塞;
3)入口管路有氣泡;
4)溶劑濾頭堵塞;
5)所用溶劑不正確,儲液瓶中無溶劑;
6)溫度太高,流速太低;
7)泵未輸送流動相;
8)泵關(guān)閉或保險絲斷了。
造成壓力波動問題的主要原因:
1)管路脫氣機(jī)排氣不充分;
2)流動相未正確脫氣;
3)所用溶劑不混溶或易揮發(fā);
4)壓力傳感器及泵問題。