2023-05-23
哈嘍,有液相實驗經驗的小伙伴應該都清楚,在考察液相色譜分離條件時,最重要的參數(shù)就是洗脫條件。其中洗脫條件又分為等度洗脫和梯度洗脫。下面小編就簡單帶大家來看下這兩種洗脫方式的優(yōu)點和缺點,以及他們的適用范圍。
01 等度洗脫
是指在樣品組分的分析周期中,流動相的組成比例和流速恒定不變的洗脫方式。
優(yōu)點
1、對于等度洗脫而言,由于方法運行時,流動相的比例不發(fā)生變化,所以它對儀器的要求不高,只需要一個單元泵就可以運行方法。
2、由于等度洗脫條件單一,所以比較容易用來摸索方法設置,例如改變流動相比例,改變柱溫等條件。
3、由于等度洗脫每次運行時的流動相比例相同,所以相同方法運行多個樣品時,樣品之間不需要設置平衡時間來讓系統(tǒng)恢復到所需的流動相比例。
缺點
1、越往后出峰的組分色譜峰越寬。
2、并且大多數(shù)等度洗脫的方法分析時間較長。
02 梯度洗脫
是指在同一個分析周期中,按一定程序不斷改變流動相的濃度配比的洗脫方式。
優(yōu)點
1、梯度洗脫能夠規(guī)避掉等度洗脫的問題,例如梯度洗脫的樣品峰,無論先出峰還是后出峰的組分,它們的峰形基本都能保證尖銳對稱。
2、由于梯度洗脫通常設置的流動相比例是讓洗脫強度越來越強,這樣能保證在較短的時間內,讓樣品中強保留組分也能被洗脫出來。
缺點
1、如果在運用梯度洗脫時,流動相比例變化過快,可能產生鬼峰影響檢測。
2、梯度洗脫對儀器的配置要求較高,通常需要配置四元泵或者二元泵。
3、梯度洗脫每次運行樣品之間,需要設置一定的平衡時間,來讓系統(tǒng)中流動相的比例到達初始流動相比例。
4、梯度洗脫的方法設置復雜,例如影響分離的:有初始流動相比例、流動相的梯度變化、結束流動相比例、柱溫箱溫度等,所以方法的開發(fā)和優(yōu)化會較為復雜。
03 適用范圍
用梯度洗脫還是等度洗脫,主要看雜質與雜質、主峰、溶劑峰的分離的情況。同一物質有梯度洗脫和等度洗脫兩種條件時,梯度洗脫的認可度較高。下面就是更適合梯度洗脫的適用情況。
1、多組分樣品的極性范圍大,用等度無法全部洗脫的樣品。
第一種情況:雜質和主成分極性相差很大,長時間雜質未能洗脫出來,就必須考慮用梯度。
第二種情況:雜質極性比主峰的大,等度時要想主峰時間合適雜質全堆在前邊,雜質分開主峰又出峰太晚,這種情況也得考慮梯度洗脫。
2、大分子量樣品(肽、蛋白質、合成聚合物等)一般采用梯度洗脫分離會更好,尤其是反相條件。這類樣品,往往對有機相的量特別敏感,有機相的微小變化就會使樣品的保留時間發(fā)生很大的變化,導致用等度條件檢測時,無法使保留時間控制在一個穩(wěn)定合適的范圍內。
3、改善峰型。
4、目標峰出峰后,短時間內提高有機相比例,洗脫強保留干擾雜質。
5、用等度洗脫無法達到分離的情況。有些物質,特別是結構相近的物質,等度條件下無法達到分離,而采用梯度模式,因組分在有機相變化的選擇性差異,可以達到分離,這種情況下就需要采用梯度條件進行測試。